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Interaction studies of HvVPS24 within the Barley ESCRT-III complex

Naghibi, Neda (2017) Interaction studies of HvVPS24 within the Barley ESCRT-III complex.
Masterarbeit, University of Vienna. Zentrum für Molekulare Biologie
BetreuerIn: Stöger, Eva

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URN: urn:nbn:at:at-ubw:1-23239.56392.470072-9
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Abstract in English

The Endosomal Sorting Complex Required for Transport (ESCRT)-III has been studied in plants and has key roles in protein sorting, membrane fission and in multivesicular body (MBV) formation. Barley seeds, which were examined in this project, are efficient and requested platforms in molecular farming in terms of production of high quality recombinant pharmaceutical proteins. Moreover barley seeds are used as a nutrition source for human and animals. The members of ESCRT-III were identified and their localization and putative function have been characterized in barley endosperm. It has been shown that the localization of recombinant expressed ESCRT-III barley proteins such as HvSNF7a, HvVPS24 and HvVPS60a are different between aleurone and subaleurone layers of barley endosperm. It has been also reported that the localization may differ during the various developmental stages. The aim of this study was to identify the interactions of HvVPS24 with ESCRT-III components like HvSNF7, HvVPS60, HvVPS4 and a putative seed storage protein HvHinb2. The project was designed using yeast two-hybrid (Y2H) and biomolecular fluorescence complementation (BiFC) assay to test the protein-protein interactions between these proteins. BiFC was performed in Nicotiana benthamiana leaves and analyzed by confocal microscopy. The examined HvVPS24 does interact lightly with HvSNF7 but no HvVPS24 homodimerization was observed. According to our yeast two-hybrid and BiFC analysis there is no HvVPS24 interactions with other components of HvESCRT-III. In further studies Co-IP assays should be performed to identify the HvVPS24/HvSNF7/HvVPS60 partners in Barley endosperm.

Schlagwörter in Englisch

barley endosperm / ESCRT-III / HvVPS24 / protein-protein interaction / endomembrane system in plant

Abstract in German

Die Endosomal Sorting Complex Required for Transport (ESCRT)-III Maschinerie wird in Pflanzen studiert und spielt Schlüsselrollen in der Sortierung von Proteinen und der Membran Fission aber auch in der multivesikulären Kompartmentbildung. Gerste dient als Nahrungsquelle für Menschen und Tiere. In der Wissenschaft wird dieses Getreide auch als Modellpflanze und für die Produktion von rekombinanten Proteinen verwendet. Die Gerste ESCRT-III Mietglieder wurden identifiziert und erste Lokalisierungstudien bzw. ihre putativen Funktionen wurden in Gerste Samen studiert. Die Lokalisierung von rekombinant exprimierten ESCRT-III Proteinen (wie HvSNF7a, HvVPS24 und HvVPS60a) ist zwischen Aleurone und Subaleurone unterschiedlich und ändert sich auch während der Entwicklung. Ziel dieser Masterarbeit war es, die Interaktionen von HvVPS24 mit ESCRT-III Komponenten wie HvSNF7, HvVPS60, HvVPS4 und dem putativen Speicherprotein HvHinb2 zu identifizieren. Die Interaktionen wurden mit dem Hefe-Zwei Hybrid System und der Bimolekularen Fluoreszenzkomplementation identifiziert. Die Bimolekulare Fluoreszenzkomplementation wurde in Blättern von Nicotiana benthamiana ausgeführt und die Interaktionen wurden mittels Konfokal Mikroskope untersucht. Das untersuchte HvVPS24 interagiert leicht mit HvSNF7, zeigt aber keine HvVPS24 Homodimerisierung. Es wurden keine weiteren Interaktionen zwischen HvVPS24 und anderen Komponenten von HvESCRT-III beobachtet. In einer weiterführenden Arbeit sollte ein Ko-Immunopräzipitation durchgeführt werden, um Interaktionspartner von HvVPS24/HvSNF7/HvVPS60 zu entdecken.

Schlagwörter in Deutsch

Endosperm der Gerste / ESCRT-III / HvVPS24 / Protein-Protein Interaktionen / Endomembrane System in Pflanzen

Item Type: Hochschulschrift (Masterarbeit)
Author: Naghibi, Neda
Title: Interaction studies of HvVPS24 within the Barley ESCRT-III complex
Umfangsangabe: 62 Seiten : Illustrationen, Diagramme
Institution: University of Vienna
Faculty: Zentrum für Molekulare Biologie
Studiumsbezeichnung bzw.
Universitätslehrgang (ULG):
Masterstudium Molekulare Biologie
Publication year: 2017
Language: eng ... Englisch
Supervisor: Stöger, Eva
Assessor: Stöger, Eva
Classification: 42 Biologie > 42.13 Molekularbiologie
AC Number: AC14469785
Item ID: 48626
(Das PDF-Layout ist ident mit der Druckausgabe der Hochschulschrift.)

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